細胞および分子イメージングコア

統合神経科学 COBRE センターの細胞分子イメージング (CMI) コア施設の使命は、ネバダ大学リノ校で生体分子の細胞および分子イメージングを実行するために必要なインフラストラクチャとリソース、およびさらなる研究のための培地の準備を提供することです ( UNR）。 中核施設は、理学部生物学部のフライシュマンライフサイエンス棟の 3 階にあります。

CMIコア施設は、生きた脳や動物全体の深部組織をスキャンするための新しいScientifica HyperScope二光子イメージングシステム、LIGHTNINGを搭載したライカSP8共焦点顕微鏡システムなど、最先端の機器へのアクセスを提供し、細胞の詳細を観察し、解像度 120 nm までの動態を観察するライカ サンダー 3D 組織正立顕微鏡、胚、器官、およびショウジョウバエや線虫などの小型生物の画像化を目的としたライカ サンダー モデル生物実体顕微鏡、ノーザンブロッティング用の GE フォスフォイメージャー、ウェスタンブロッティング用の BioRad ChemiDoc、正確かつ定量的な PCR 用の 2 台の BioRad リアルタイム PCR 装置、自動 PCR セットアップ用の QIAgility、GeneSys 180 UV/Vis 分光光度計、および Quibit 4 蛍光光度計。

コアのさらなる機能には、モデル生物として使用されるショウジョウバエおよび線虫の飼育のための培地調製器具およびリソースが含まれます。

場所: FA 318 (ドアキーによるアクセスが必要)

二光子顕微鏡は、細胞神経科学にとって不可欠なツールとなっており、インビトロおよびインビボでの生きた脳や動物全体の細胞の高解像度蛍光イメージングを可能にします。 HyperScope システムは、Mai-Tai eHPDS 広範囲に調整可能なチタンサファイアレーザー (690 ～ 1040 nm)、複数の対物レンズ (16 倍、20 倍、40 倍) を備えたカスタムビルドの 2 光子顕微鏡で、当社のブレッドボード上に設置され、防振テーブル。 Scientifica SciCam Pro CCD カメラを使用すると、24 fps (フル解像度) および 40 fps (ビニング 2 x 2) のビデオ フレーム レートの機能イメージングを実行できます。 検出器アセンブリには、1 つの赤方偏移 PMT モジュールと 1 つの GaAsP PMT モジュール、および GFP (470/40x 消光、525/50m 放射) および mCherry (560/40x 消光、630/75m 放射) 用のフィルターセットを備えた落射蛍光イメージングが含まれています。 イメージング パス内のスキャン ミラーは、ニーズに応じて複数の構成で配置できます。 最大 3 つのミラーを直列に使用すると、ガルバノ/ガルバノ (GG)、レゾナント/ガルバノ (RG)、またはレゾナント/ガルバノ/ガルバノ (RGG) の配置から選択できます。 顕微鏡には、振動のない動きを確保するために超滑らかな Z 軸ドライブが取り付けられており、Z 軸は最小ステップ サイズ 0.1 mm で Z スタックを取得するためのソフトウェアで制御されます。 ピエゾ Z 軸対物ポジショナーを追加すると、最大 400 mm のボリューム イメージングが可能になります。 この顕微鏡は、サブステージ光学系とライザーブロックを取り外すことで、簡単に構成でき、in vitro アプリケーションと in vivo アプリケーションの間で切り替えることができます。 このシステムは、生体サンプルの光と騒音による汚染を防ぐために、遮光ケージに囲まれています。

このプラットフォームには、受賞歴のある Scientifica SciScan 取得ソフトウェアが含まれており、ユーザーは SciScan を LabView や ScanImage などのカスタム作成アプリケーションと簡単に統合できます。 Scientifica が使用する ScanImage ソフトウェア インターフェイス (Vidrio Technologies) は、HHMI Janelia Farm によって特に神経科学アプリケーション向けに開発されたもので、市場での 2 光子レーザー スキャン用の最も先進的なソフトウェアであると考えられています。

Scientifica HyperScope の主な独自機能は次のとおりです。

場所: FA 324

Leica TCS SP8 LIGHTNING 共焦点は、共焦点顕微鏡のサブ回折横方向解像度を利用した超解像度取得による画像情報抽出を可能にします。 これにより、細胞の詳細を捕捉し、STED 超解像度顕微鏡の機能に近い 120 nm までの解像度でダイナミクスを観察することができます。 直立共焦点は、複数のレーザーライン (ダイオード 405、青 488、緑 552、赤 638 nm) を使用して、最大 3 つの検出チャネル (2 つの PMT、1 つの HyD) から同時に収集できます。 共焦点は、従来のタンデムスキャナー (8 kHz)、スーパー Z ガルボステージ type S、複数の対物レンズ (10 倍、20 倍、25 倍、40 倍、63 倍) で構成され、防振テーブル上に設置されます。 共焦点は、Leica LAS-X ソフトウェアと 30 インチ モニターを備えたコンピューター ワークステーションに接続されています。

共焦点の主な特徴は次のとおりです。

場所: FA 324

THUNDER イメージャーは、ライカ マイクロシステムズが独占的に開発した、まったく新しいクラスの計算クリア高解像度広視野顕微鏡です。 これらのイメージャは、一般に広視野顕微鏡を使用して取得される厚い 3D サンプルに特有の焦点の合っていないぼやけや曇りを瞬時に除去することで、鮮明なデータと高品質の画像を取得できます。 これらのイメージャは、新しい LAS-X ナビゲータ ソフトウェアによる画像取得からデータ分析までのイメージング ワークフローも大幅に短縮します。 THUNDER Imager 3D Tissue は電動正立顕微鏡で、超高速 DFC 9000 GT/C カメラが装備されており、細胞培養、組織、固定サンプル、および透明な組織に最適です。 THUNDER Imager Model Organism は、胚、臓器全体、および小さな生物を画像化することを目的とした M205 FCA 実体顕微鏡です。

THUNDER 3D 組織イメージャーの主な機能は次のとおりです。

THUNDER Model Organism イメージャーの主な機能は次のとおりです。

場所: FA 312 (共有コア/機器室、ドアコードアクセスが必要)

タイフーン フォスフォイメージャーは、放射性等方性標識サンプルを高感度かつ定量的に測定するための、高速かつ多用途のレーザー スキャナーです。 タイフーンは、タンパク質、核酸、その他の生体分子を正確に定量するための高速性と分解能を備えた非共焦点可変モード レーザー スキャナーです。 スキャナは、蓄積蛍光体スクリーンを備えた「フィルムレス」オートラジオグラフィーを備えています。 このレーザーは、最大 25 μm ピクセル解像度で 16 ビット画像を生成し、ゲルやブロットの正確な定量を行うことができ、最大 240 x 250 mm のゲルを 2 分未満で高速にスキャンできます。 サイズ 200 X 250 mm の 2 つの蛍光体スクリーンをオートラジオグラフィーに使用できます。 このスキャナーは、放射性標識サンプル中の広範囲の同位体を検出できます。 ホスホイメージャー システムのすぐ隣には、画像とデータのオンサイトでの定量的および定性的分析を可能にするソフトウェア パッケージを備えた PC コンピューターがあります。

タイフーン イメージャーの主な機能は次のとおりです。

場所: FA 312 (共有コア/機器室、ドアコードアクセスが必要)

Biorad Chemidoc は、ゲルや膜中のタンパク質サンプルを正確に定量するための、簡単で高性能なゲルおよびブロット イメージングです。 Chemidoc は、従来のブロッティング技術と革新的なツールを組み合わせて 5 段階のアプローチでウェスタン ブロッティングを合理化し、バンドの定量化を改善し、ウェスタン ブロッティング前の電気泳動結果とブロット転写品質の迅速な評価を可能にします。 Chemidoc を使用すると、わずか 15 分で迅速なウェスタン ブロット結果が得られ、効率的なタンパク質転写は 3 分で、無染色ゲル イメージングは​​ 5 分で可能になります。 組み込みソフトウェアには、定量的および定性的な画像およびデータ分析のためのすべてのツールが含まれています。 ChemiDoc で撮影した画像を直接印刷することもできます。

ChemiDoc システムの主な機能は次のとおりです。

場所: FA 314 (組織培養施設、ドアコードによるアクセスが必要)

Trans-Blot Turbo トランスファー システムは、伝統的なブロッティング技術と最新の濾紙およびバッファーを組み合わせたもので、最小限の準備時間でゲルからメンブレンへのタンパク質の迅速な転写を可能にします。 このシステムには、内蔵の白金メッキチタン陽極とステンレス鋼陰極の間に電流を流す高アンペア電源が組み込まれています。

ターボブロッターの主な機能は次のとおりです。

場所：FA 313（オートクレーブ室）

Integra 培地オートクレーブを使用すると、1 ～ 10 リットルの培地を迅速かつ穏やかに調製できます。 滅菌プロセス中の温度、時間、圧力を正確に制御することで、一定の高品質を保証します。 メディアクレーブは、C. エレガンス研究用の培地を含む、さまざまな種類の培地の調製と滅菌に使用できます。 幅広の追加ポートにより、分注前にサプリメントを安全に追加できます。 メディアクレーブは、ペトリ皿とバイアルに充填するために垂直フロー ワークステーションに収容された蠕動ポンプに接続されています。

Mediaclave の主な機能は次のとおりです。

場所: FA 312 (共有コア/機器室、ドアコードアクセスが必要)

2 台の Biorad リアルタイム PCR マシンは、高度な光学技術と正確な温度制御を組み合わせて、高感度で信頼性の高い検出、迅速なセットアップ実行、および内蔵 LCD タッチ スクリーン上でのリアルタイムの増幅トレースのモニタリングを実現します。 2 つの qPCR 検出システムのすぐ隣には、qPCR データをオンサイトで分析するための使いやすいソフトウェアを備えた PC コンピューターがあります。

CFX96 の主な機能は次のとおりです。

場所: FA 312 (共有コア/機器室、ドアコードアクセスが必要)

QIAgility は、すぐに使用できるソフトウェアを備えた簡単で便利な PCR 実験の迅速かつ高精度なセットアップを可能にするコンパクトなベンチトップ機器です。 このソフトウェアは、作業テーブルのセットアップとすべての混合の自動計算について段階的なガイダンスを提供するため、ピペット操作の手順をプログラムする必要がなくなります。 キットとサイクラーを選択し、ターゲットを定義して実行を開始するだけです。 柔軟性を高めるために、QIAgility はラップトップ コンピューターを介して操作されます。

QIAgility の主な機能は次のとおりです。

場所: FA 312 (共有コア/機器室、ドアコードアクセスが必要)

GeneSys 分光光度計は、参照セル位置としてダブル ビームが必要な場合に、ハイスループットの定量的な UV-Vis 測定を実行します。 使いやすさとパフォーマンスを最適化したこのシステムは、高解像度のカラー タッチスクリーンとオプションの Wi-Fi ネットワークを備えています。 コンパートメントは 8 ポジションのセルチェンジャー (標準) です。

GeneSys 180 UV/VIS の主な機能は次のとおりです。

場所: FA 314 (組織培養施設、ドアコードによるアクセスが必要)

Qubit 4 蛍光光度計は、DNA、RNA、タンパク質の量を正確に測定します。 Qubit と RNA IQ アッセイ キットを組み合わせると、わずか 2 つの簡単なステップで、完全な RNA と分解された RNA を正確に区別できます。 すべての Qubit アッセイでは、サンプル中のターゲット分子の濃度または品質が、ターゲットに結合した場合にのみシグナルを発する蛍光色素によって報告されるため、結果に対する汚染物質の影響が最小限に抑えられます。 使いやすいタッチスクリーンメニューにより、必要なアッセイを簡単に選択して実行でき、わずか数秒で結果が表示されます。

Qubit 4 蛍光光度計の主な特徴は次のとおりです。

スタッフのラボ/コア技術者 (未定) は、当社のすべての機器とソフトウェアについて研究者を支援するために、基本的なトレーニングと技術サポートを提供します。 コアに関する情報については、コアディレクターのAlexander van der Linden博士にお問い合わせください。 [email protected] まで。

共焦点および二光子イメージングの場合:

分子イメージングとアクセサリ: